MS、0.8%Agar、3%Sucrose培地 pH5.8 (1L)
Sucrose:30g
MURASHIGE AND SKOOG SALT MIXTURE:4.60g (1L用1パック)
MS Vitamin Solution(×1000):1.0mL
250mM MES(pH5.9):10mL
1N KOH(pH調節用):~400μL (→やりすぎた場合は1N or 0.1N HClで調節)
Agar Powder:8.0g
- 冷蔵庫からMURASHIGE AND SKOOG BASAL SALT MIXTUREのアルミパックを出し、常温になるまで置いておく。
- 同じく冷蔵庫からMS Vitamin Solution(×1000)を出して、析出している分を温めて溶かす(→ビーカーに水を張って電子レンジで60~70℃くらいに温めたお湯につけて振って、つけて振ってして溶かす。火傷しないように)。最近はマグネチックスターラーの撹拌子を入れてあるので撹拌して結晶を砕いて溶かす。
- 1LのポリビーカーをミリQ水で3回すすぐ(きれいだとは思うが一応)。
- ポリビーカーを電子天秤に乗せて、Sucroceを量り入れる。
- プラスチック皿にMURASHIGE AND SKOOG BASAL SALT MIXTUREを量り、ビーカーへ。使いさしを保存する場合は折りたたんでテープで密封し、開封日と使用量・残量を記録しておくこと。湿気やすいので注意。
- ミリQ水を全量の9割(900-950mL)くらいまで入れる。
- MS Vitamin Solution(×1000)をピペットで加える。
- 撹拌子を入れて撹拌し、校正したpHメーターを投入(2点校正ならpH4→7?)。だいたいpH4.0付近かと。
- 250mM MES(pH5.9)をピペットで加え、1N KOHでpHを5.8に合わせる。
- Agar Powderを量り、メディウム瓶に入れておく。作る量によっては瓶をいくつかに分けておく。液体を瓶の容量いっぱいいっぱいまでは入れないように。
- メスシリンダーで正確ににメスアップした溶液をメディウム瓶に加え、Agar Powderの塊ができないようによく揺り混ぜる。
- キャップを緩めに締め、アルミ箔で覆いオートクレーブへ(121℃、15分)。
- クリーンベンチ内で必要に応じて抗生物質などを加え、滅菌したマヨ瓶なりシャーレなりへ分注。ヤケドに注意。
- ラベルして4℃で保存。
- オートクレーブ中に恒温槽を60℃に設定しておいて、メディウム瓶をいくつかに分けて作って放り込んでおけば、冷えて固まらずに作業できる。
- 500mLの培地を作るとだいたい7cmマヨ瓶に厚さ2~3cmで入れて8個分くらい…?シャーレに分注すると13~15枚分くらいになるらしい
LB、1.5%Agarプレート pH7.0 (1L)
Bacto tyrptone:10g
Bacto yeast extract:5g
NaCl:10g
5N NaOH:0.2mL
Bacto-agar:15g
- 粉末試薬を量り、ビーカーに入れる。
- ミリQ水を全量の9割(900-950mL)くらいまで入れ、スターラーで混ぜ溶かす。
- NaOHをピペットで加え、pH7.0に調整する。
- bacto-agarを量り、メディウム瓶に入れておく。作る量によっては瓶をいくつかに分けておく。液体を瓶の容量いっぱいいっぱいまでは入れないように。
- メスシリンダーで正確ににメスアップした溶液をメディウム瓶に加え、agarの塊ができないようによく撹拌する。
- キャップを緩めに締め、アルミ箔で覆いオートクレーブへ(121℃、15分)。
- 65℃程度に冷めたら必要に応じて抗生物質を入れ、クリーンベンチ内で滅菌したシャーレへ分注。ヤケドに注意。
- ラベルして4℃で保存。